Приложение к Приказу от 07.04.2010 г № 296-П Проект
Инструкция по организации проведения лабораторного исследования на вич-инфекцию
Настоящая инструкция разработана на основании типовой инструкции по противоэпидемическому режиму лаборатории диагностики СПИД, утвержденной заместителем министра здравоохранения СССР А.И. Кондрусевым 5 июня 1990 г. N 42-28/38-90.
Основным методом диагностики ВИЧ-инфекции является обнаружение антител к вирусу. Антитела к ВИЧ появляются у 90 - 95% зараженных в течение 3 месяцев после заражения, у 5 - 9% - через 6 месяцев после заражения и у 0,5 - 1% - в более поздние сроки. Наиболее ранний срок обнаружения антител - вторая неделя от момента заражения. Обнаружение антител к ВИЧ включает два этапа.
На первом этапе проводится выявление суммарного спектра антител против антигенов ВИЧ с использованием различных тестов: иммуноферментных, агглютинационных, комбинированных, гребеночных, мембранно-фильтрационных или мембранно-диффузных.
На втором этапе проводят референс-исследования методом иммунного блотинга: проводится определение антител к отдельным антигенам вируса. Допустимо использование тест-систем, разрешенных к применению Министерством здравоохранения и социального развития РФ. Диагностические процедуры должны проводиться в соответствии с утвержденными инструкциями по применению тестов.
Преаналитический этап является важным звеном в диагностике ВИЧ-инфекции, так как нарушения, допущенные на этом этапе, влияют на результат и его интерпретацию:
1.Забор крови производится из локтевой вены в количестве 3 - 5 мл.
2.Полученный материал не рекомендуется хранить более 12 часов при комнатной температуре и более 1 суток в холодильнике при температуре 4 - 8 градусов. Целесообразным является после взятия крови сразу отобрать из нее сыворотку, которая может храниться в течение 7 дней при температуре 4 - 8 градусов.
3.На пробирках с образцами должны быть указаны идентифицирующие данные пациента.
4.В процедурном кабинете заполняется сопроводительное направление (форма 264/У-88) в двух экземплярах, в которых указано: фамилия, имя, отчество пациента полностью, пол, дата рождения, адрес, код контингента, гражданство, дата взятия материала крови, Ф.И.О. врача, назначившего исследование. Зачеркивать, вносить исправления запрещается.
5.Направление доставляется вместе с исследуемой кровью, отдельно от клинического материала, в полиэтиленовых пакетах. Образцы, взятые для исследования, помещаются в закрытые герметичными крышками одноразовые пробирки, затем - в штативы, которые размещаются в плотно закрывающейся таре (контейнеры) или сумке-холодильнике, легко подвергающейся дезинфекции. Доставка крови в лабораторию проводится персоналом, прошедшим специальный инструктаж.
На первом этапе диагностики ВИЧ-инфекции проводится скрининговое исследование крови. При получении положительного результата анализ проводится еще два раза (с той же сывороткой, в той же тест-системе). Если при этом был получен еще один положительный результат (два положительных результата из трех постановок ИФА), сыворотка считается первично положительной и направляется в референс-лабораторию для дальнейшего исследования.
Клинический материал для арбитражного исследования доставляется в референс-лабораторию в одноразовых микропробирках (типа Эппендорф), с указанием идентифицирующих данных пациента и направлением, в которых указано:
1.Фамилия, имя, отчество пациента полностью.
2.Пол.
3.Дата рождения.
4.Адрес, код контингента.
5.Гражданство.
6.Дата взятия материала крови.
7.Дата последнего положительного анализа с указанием наименования тест-системы, серия, срок годности, результат исследования в ИФА (оптическая плотность (ОП) образца, ОП - критическое).
8.Наименование учреждения, направившего материал на арбитражные исследования, должность, Ф.И.О., подпись направившего материал.
В референс-лаборатории первично положительная сыворотка повторно исследуется в ИФА в другой тест-системе, выбранной для подтверждения.
При получении положительного результата анализа сыворотку необходимо исследовать в иммуноблоттинге.
При получении отрицательного результата во второй тест-системе сыворотка повторно исследуется в третьей тест-системе. В случае получения отрицательного результата анализа и во второй, и в третьей тест-системе выдается заключение об отсутствии антител к ВИЧ.
При получении положительного результата в третьей тест-системе сыворотка также направляется на исследование в иммуноблоттинге. Результаты, полученные в подтверждающем тесте (иммуноблот), интерпретируются как положительные, неопределенные, отрицательные.
При получении отрицательного результата в иммуноблоттинге сыворотку исследуют на антигенной тест-системе.